色情直播 淫羊藿苷对血管性勃起功能收敛大鼠的调整后果及机制初探

勃起功能收敛（erectile dysfunction色情直播，ED）是男性反复或一语气出现不可使阴茎充分勃起或握续勃起，无法获取泄气性交的疾病[1-2]。ED病因较为复杂，触及内分泌激素水平、心血管系统健康气象、情描摹态等多方面因素[3-5]。在ED类型中，血管性ED占比最大，约占50%[6-7]。

淫羊藿在中国传统医学纪录中有莳植男性性功能和生殖能力的作用，其主要活性要素为淫羊藿苷[8-10]。恒久口服淫羊藿苷不错改善血管及神经挫伤性等ED大鼠阴茎海绵体平滑肌中神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）和指点型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase，iNOS）的基因和卵白抒发，对ED病理变化有设备作用，从而改善勃起功能[11]。在血管性ED的发生、发展中，血管内皮功能的踏实止境遑急，多种因素在守护血管内皮功能的踏实中推崇遑急作用[12-13]。鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate，S1P）是守护血管内皮功能踏实的分子之一，接头标明在内环境稳态或其他应激条款下，血管腔中的S1P与鞘氨醇-1-磷酸受体1（sphingosine-1-phosphate receptor 1，S1PR1）的讨好是保证血管齐全性的遑急条款[14-15]。本接头不雅察了淫羊藿苷对血管性ED大鼠的调整后果，并通过检测α-平滑肌肌动卵白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、S1P和S1PR1的抒发水平初步探究淫羊藿苷对血管性ED大鼠的可能作用机制。

1 材料和方式 1.1 本质动物

8周龄健康雄性SD大鼠60只，体重200~250 g，购于成都达硕本质动物有限公司[动物分娩许可证号：SCXK（川）2019-0031]。本质动物由四川省东说念主民病院动物接头所专职东说念主员饲养，喂养和生存环境疏导，饲养室温度保握在20~25℃，相对湿度为50%~65%，招揽光照定时安设提供适合的日夜光变化周期（12 h光照、12 h黑暗或14 h光照、10 h黑暗）。本接头的动物本质方式妥当医学伦理学要求，经四川省东说念主民病院动物伦理委员会审批（S2019-040-03）。

1.2 主要仪器与试剂

RM-6240E多说念生理信号收罗处治系统（成都仪器厂），淫羊藿苷（货号：SI8010，纯度≥98%，北京索莱宝科技有限公司），他达拉非片（批号：H20170284，好意思国礼来制药公司），大鼠S1P ELISA检测试剂盒、大鼠S1PR1 ELISA检测试剂盒、大鼠α-SMA ELISA检测试剂盒（货号：ZC-35940、ZC-54753、ZC-36249，上海茁彩生物科技有限公司），阅兵Masson三色染色液（货号：BM210430，合肥博好意思生物科技有限株连公司）。Pannoramic 250 Flash Ⅲ型显微镜玻片扫描仪（匈牙利3DHISTECH公司）。

cphi制药在线 1.3 血管性ED大鼠模子的设立和假手术组大鼠的处治

大鼠经浮浅SPF级饲料和饮用水喂养并适合1周后，招揽双侧髂内动脉结扎的方式设立血管性ED大鼠模子[16-17]。已完成双侧髂内动脉结扎的大鼠分笼饲喂，每笼1只，以利于伤口愈合。假手术组将大鼠固定在手术台上，作念中下腹部正中切口，掀开腹腔后，寻找并露出双侧髂内动脉，不作念结扎，然后复位腹腔组织内脏器，交替缝合腹膜、肌肉、皮下脂肪和皮肤。

1.4 本质分组及处治

血管性ED模子大鼠共50只色情直播，平中分红5组：模子组、阳性对照组及淫羊藿苷低、中、高剂量组，每组10只。阳性对照组大鼠按照每天0.8 mg/kg的剂量予以他达拉非溶液灌胃，淫羊藿苷低、中、高剂量组永诀按照每天20、40、80 mg/kg的剂量予以淫羊藿苷混悬液灌胃，模子组和假手术组（10只）大鼠不进行药物干预，只予以每天1 mL生理盐水灌胃。一语气灌胃30 d后取大鼠阴茎海绵体标本，置于冻存管中－80 ℃保存。

1.5 大鼠阴茎最大海绵体内压（maximal intracavernous pressure，ICPmax）测量

造膜4周后，通过刺激大鼠的阴茎海绵体神经诱发阴茎勃起，测量其ICPmax，评估大鼠的勃起功能[18]。具体测量方式：当先将压力转念器与RM-6240E多通说念生理信号收罗处治系统纠合，压力转念器泵头内注入肝素盐水约20 mL。将压力转念器泵头上的26 G打针器针头斜行20°角刺入大鼠左侧阴茎海绵体内，通过RM-6240E多说念生理信号收罗处治系统不雅察阴茎海绵体内压（intracavernous pressure，ICP）慢慢踏实后，按照寻找盆腔星状神经节的方式找到海绵体神经，对海绵体神经进行电刺激，不雅察刺激后的ICPmax[19]。招揽疏导方式共刺激阴茎海绵体神经2次，2次之间停止10 min。记录第2次刺激后的ICPmax动作该大鼠的阴茎ICPmax数据。

1.6 大鼠阴茎海绵体组织Masson染色

取大鼠部分阴茎海绵体组织，按病理学检测的模范功课轨范进行脱水、修剪、包埋、切片、染色、封片等，终末镜下不雅察。招揽Masson染色法测定大鼠阴茎海绵体组织纤维化情况。每张切片先在4倍镜下不雅察一皆组织，再字据组织大小及抒发情况永诀中式3个区域放大40倍收罗图像。招揽Image-Pro Plus 6.0软件分析收罗图像的积分光密度（integral optical density，IOD）。

1.7 大鼠阴茎海绵体中α-SMA、S1P、S1PR1抒发水平的检测

招揽ELISA试剂盒检测阴茎海绵体中α-SMA、S1P、S1PR1的抒发水平。

1.8 统计学处治

哄骗GraphPad Prism 5软件进行统计学分析。计量府上以x±s暗示，多组间比拟招揽方差分析，两两比拟招揽Tukey法。对模子组及淫羊藿苷低、中、高剂量组大鼠的ICPmax和阴茎海绵体中α-SMA、S1P、S1P1水平进行线性转头分析。教练水准（α）为0.05。

2 适度 2.1 各组大鼠阴茎海绵体的ICPmax和Masson染色IOD比拟

假手术组大鼠阴茎海绵体的ICPmax高于其他5组（P均＜0.05）；模子组大鼠的ICPmax低于其他5组（P均＜0.05）；他达拉非组大鼠的ICPmax高于淫羊藿苷低剂量组，但低于淫羊藿苷中、高剂量组（P均＜0.05）。假手术组大鼠阴茎海绵体的Masson染色IOD低于模子组、他达拉非组及淫羊藿苷低、中剂量组（P均＜0.05）；模子组大鼠的IOD高于其他5组（P均＜0.05）；他达拉非组大鼠的IOD低于淫羊藿苷低、中剂量组，但高于淫羊藿苷高剂量组（P均＜0.05）。见表 1。

表 1 各组大鼠阴茎海绵体的ICPmax和Masson染色IOD比拟  2.2 各组大鼠阴茎海绵体中α-SMA、S1P、S1PR1的抒发水平

假手术组大鼠阴茎海绵体中α-SMA的抒发水平低于淫羊藿苷高剂量组（P＞0.05），但高于其他4组（P均＜0.05）。假手术组大鼠阴茎海绵体中S1P的抒发水平高于模子组、他达拉非组、淫羊藿苷低剂量组（P均＜0.05）。假手术组大鼠阴茎海绵体中S1PR1的抒发水平高于其他5组（P均＜0.05）。模子组大鼠阴茎海绵体中α-SMA、S1P的抒发水平均低于其他5组（P均＜0.05）。模子组大鼠阴茎海绵体中S1PR1的抒发水平低于除他达拉非组外的其余4组（P均＜0.05）。他达拉非组大鼠阴茎海绵体中α-SMA的抒发水平低于淫羊藿苷高剂量组，但高于淫羊藿苷低、中剂量组和模子组（P均＜0.05）。他达拉非组大鼠阴茎海绵体中S1P的抒发水平低于淫羊藿苷中、高剂量组（P均＜0.05）。他达拉非组大鼠阴茎海绵体中S1PR1的抒发水平低于淫羊藿苷低、中、高剂量组（P均＜0.05）。见表 2。

表 2 各组大鼠阴茎海绵体中α-SMA、S1P、S1PR1的抒发水平  2.3 模子组和淫羊藿苷低、中、高剂量组大鼠ICPmax与阴茎海绵体α-SMA、S1P、S1PR1水平之间的线性转头分析

线性转头分析适度自满，大鼠阴茎海绵体α-SMA水平与ICPmax之间（P=0.007 8，F=7.896，r2=0.172 0）、α-SMA水平与S1P水平之间（P＜0.000 1，F=27.65，r2=0.421 2）、α-SMA水平与S1PR1水平之间（P＜0.000 1，F=37.64，r2=0.497 6）、S1P水平与ICPmax之间（P=0.006 1，F=8.453，r2=0.182 0）、S1PR1水平与ICPmax之间（P=0.047 2，F=4.205，r2=0.099 6）均存在线性联系。

3 征询

淫羊藿具有补肝益肾、结实筋骨、消除风湿的功效，是强阳起痿方剂中最常使用的中药材之一[20]。由淫羊藿制成的中成药被大宗哄骗于临床ED的调整中，并取得讲究的疗效。淫羊藿在东说念主体内的主要活性要素是淫羊藿苷，当今合计淫羊藿苷调整ED的机制主要聚会在一氧化氮-环鸟苷酸-磷酸二酯酶5通路[21]，尚未发现其他可能的作用机制。本接头不雅察了淫羊藿苷对大鼠血管性ED的调整作用，并初步探索其是否通过调节S1P、S1PR1水平促进血管内皮的重生和踏实，达到改善阴茎勃起功能的倡导。

本接头通过结扎双侧髂内动脉构建血管性ED大鼠模子，通过测量ICPmax信托血管性ED模子是否造模得手。立地将大鼠分红不同组别，比拟其组间勃起功能，进一步评价淫羊藿苷对勃起功能的改善情况，同期比拟不同剂量淫羊藿苷与他达拉非改善勃起功能的后果互异。适度标明，中、高剂量淫羊藿苷能有用调整大鼠血管性ED，且调整后果优于他达拉非。本接头不雅察到双侧髂内动脉结扎粗略形成大鼠阴茎海绵体的α-SMA水平权臣裁减，提醒血管性ED模子对阴茎海绵体血管稳态形成了收敛，动脉细心减少收敛了血管内皮功能。淫羊藿苷可权臣提肥大鼠阴茎海绵体的α-SMA水平，提醒淫羊藿苷粗略提肥大鼠阴茎海绵体内血管内皮稳态，促进阴茎海绵体血管平滑肌熟谙。他达拉非莫得权臣莳植血管性ED大鼠阴茎海绵体中α-SMA的水平，提醒他达拉非可能不可改善阴茎海绵体血管内环境。淫羊藿苷组大鼠阴茎海绵体的S1P水平较着加多，标明淫羊藿苷粗略有用促进S1P抒发。本接头同期对淫羊藿苷组大鼠阴茎海绵体的S1P、S1PR1、α-SMA水平与ICPmax进行线性转头分析，得出S1P、S1PR1水平与α-SMA水平之间存在线性联系，α-SMA、S1P、S1PR1水平与ICPmax存在线性联系，初步提醒淫羊藿苷可能通过调节S1P、S1PR1水平推崇保护血管内皮并促进血管重生的作用，达到改善血管性ED的倡导。但各打算间存在线性联系，并不可确证淫羊藿苷即是通过S1P/S1PR1通路来推崇血管内皮功能保护作用的，后续还需在体外细胞本质中一一双通路中的每个才气加以考证。

本接头初步探索了不同剂量淫羊藿苷对血管性ED大鼠的调整后果，哄骗于东说念主体的剂量联系在动物本质熟谙后还需进一步接头。本接头检测妙技较为单一，后续还需用免疫组织化学染色、卵白质陈迹法及qPCR等方式对S1P及S1PR1的水平进行测定色情直播，通过多种方式得到更精准可靠的论断。